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产品分类

中文名:酵母阳性克隆检测试剂盒(杂交筛库)

英文名:Positive clone assay

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

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产品编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SK2420-20T20T198198
SK2420-200T200T898898
SK2420-50T50T298298
产品简介

保存条件:-20 ℃储存,未开封有效期24个月。

包装内容:

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产品说明:

本产品用于酵母单杂双杂筛库系统,可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。

PCR Mix含Taq、dNTP、PCR buffer和水,只需要补充模板5 μL,引物混合物1 μL即可用于PCR扩增。可供50 μL PCR体系进行200次扩增实验。3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列载体构建的AD文库。每50 μL体系加入1 μL引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。本试剂盒除提供菌落裂解液I用于平板菌落PCR外(可供200 T),还免费提供菌液裂解液II用于菌液PCR(可供20 T)。

使用方法:

菌落样品

1.准备PCR预混液:根据检测克隆数,等比例扩大配制体积。

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2.吸取5 μL菌落裂解液I加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

3.用无菌牙签或者枪头刮取适量直径1-2 mm的酵母菌落悬浮在菌落裂解液I中。

4.吹打或者震荡混匀后,静置5 min,即为裂解产物。

5.(可选步骤)于-20 ℃冷冻5 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s。

6.在裂解产物中加入45 μL PCR预混液(已加引物),直接PCR扩增。

注意:

1. 先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。

2. 培养时间短的样品,无需冷冻。冷冻完的样品可直接加入PCR预混液,解冻与否均可。

3. 团状酵母菌落很难裂解,吹打或者震荡混匀尤为重要。

菌液样品

1. 吸取5-10 μL菌液裂解液II加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

2. 再加入等体积的酵母菌液,震荡混匀。

3. 于-20 ℃冷冻3 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s后,PCR仪95 ℃保温2 min。

4. 12,000 rmp离心2 min,取裂解产物(上清),用于PCR扩增。

PCR反应体系:

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PCR反应条件:

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注意事项:

1. 菌落PCR前,先刮取部分菌落保存,可以有效避免样品污染和丢失。

2. 新鲜菌落的PCR成功率接近100%。如生长期较长的菌落,请先进行预实验。

3. 如部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议小摇之后,用快速酵母质粒提取试剂盒(PE052)提取(约需30 min),再进行PCR扩增。

更多筛选培养基及相关产品详见www.coolaber.com

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