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产品分类

中文名:Super酵母转化试剂盒II(酿酒酵母专用)

英文名:Super Yeast Transformation Kit II

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

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产品编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SK2402-200T200T15981598
产品简介

储存条件:-20 ℃保存,未开封有效期24个月。Y3避免多次冻融;Y1、Y2溶液可2-8 ℃保存。

产品内容:

11.png

产品说明:

  Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒(SK2401)可以完成酿酒酵母感受态制备,感受态冻存,转化实验。最突出的优点可一次性制备200支感受态,-80 ℃冰箱可冻存一年,后续酵母转化实验无需重新制备感受态,操作简单快速,该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒(SK2400)基本相同。如需进一步提高酵母转化效率,可选用Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus(SK2402)或单独购买YPD Plus Liquid Medium(YT0004),转化产物用YPD Plus复苏,其转化效率可以提高50-100%。

使用方法:

感受态细胞的制备:(按小体积转化制备20支感受态计,可按比例扩大)

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30 ℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线,30 ℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落直径长至2 mm时,把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中,30 ℃过夜培养。

4.第二天转接到含有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600达到0.4-0.5,3000 rpm离心5 min,弃上清。(4 ℃保存1周内的酵母菌液,用3 mL接种50 mL YPDA培养基过夜培养)

5.用10 mL Y1溶液重悬沉淀,3000 rpm离心5 min,弃上清。

6.加入1 mL Y2溶液重悬,按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管,转文库按600 μL分装,感受态细胞即制备完毕,可直接用于转化。

7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后,再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒,或用

多层纸包裹放入泡沫盒中,先置于-80 ℃冰箱过夜后,再取出感受态置于-80 ℃冰箱,可保存一年。使用前室温融化后用于转化。

转化预混液配制:

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酵母质粒转化:

1.吸取360 μL预混液加入50 μL感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中热激60 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。

3.12,000 rpm离心15 s,弃上清。

4.(可选步骤)用1 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s,弃上清。

5.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30 ℃培养2-4天。

酵母文库转化:(需用15-50 mL离心管)

1.将2450 μL预混液加入到600 μL感受态细胞中,震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中热激90 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。

3.3000 rpm离心5 min,弃上清。

4.(可选步骤)用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养90 min,3000 rpm离心5 min,弃上清。

5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30 ℃培养2-4天。

注意事项:

1. 转化全程要求无菌操作。

2. 为了保证转化效率,务必缓慢冻存感受态,感受态不宜直接用液氮冻存。

3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。


发表文章:

Chai, Mengzhu, et al. "P3N-PIPO interacts with P3 via the shared N-terminal domain to recruit viral replication vesicles for cell-to-cell movement." Journal of Virology 94.8 (2020).(IF=4.501)

https://doi.org/10.1128/JVI.01898-19


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